血管収縮作用をもつペプチド「エンドセリン」を発見

岸本 柳沢先生は、睡眠の研究を始めるずっと前の1987年に、血管収縮作用をもつエンドセリンというペプチドを発見されましたね。これは、どんな方法によってですか。松尾壽之先生（現・国立循環器病研究センター名誉所長）や寒川賢治先生（同研究所長）がいろいろなペプチドホルモンを発見されたときは、抽出物を熱処理などして、タンパク質分解酵素を壊してからペプチドを得ていましたが。

柳沢 エンドセリンについては、血管内皮細胞の培養上清から取ったんです。無血清培地なので、非常にクリーンなところから始められて、精製するのは比較的簡単だったんです。

岸本 エンドセリンを研究されていた時代は、筑波大学の医学部で眞崎知生先生（現・京都大学名誉教授）の研究室に所属していましたね。博士号もエンドセリンの研究でお取りになって。その後、アメリカに渡ってからも、しばらくはこの研究を続けられたんですね。

柳沢 はい、そうです。

岸本 でも「博士号を取った研究室の仕事をそのまま続けているようでは」とよく言いますよね。先生も、エンドセリンの後はオレキシンの研究に移られたわけで……。

柳沢 そうですね。エンドセリンについては、1995年ごろから多くの企業が拮抗薬を発表しはじめて、もうすぐ薬になるだろうという雰囲気がありました。「基礎研究では、最もおもしろい部分は終わったのかな」と感じました。それに研究者の数も増えましたが、私は“混んでいる”のも嫌いなもので、新しいことを始めようと考えるようになったんです。

最初に探し当てたリガンドがオレキシンだった

岸本 それで、柳沢先生はオレキシンを発見されました。どのような経緯でしたか。

柳沢 1995年から96年ごろ、EST（Expressed Sequence Tag：発現遺伝子配列断片）解析プロジェクトなどが盛んに行われているなかで、相手となるリガンドが不明なGタンパク質共役受容体が、次々と同定されつつあったんですね。そこに目を付けました。テキサス大学の私の研究室の隣に、デイビッド・マンゲルスドルフという男がいて、いつも「核内オーファン受容体がね」と口にしていたんです。

岸本 つまり、リガンドが同定されていない受容体のことですね。

柳沢 はい。「マサシもやらないか。おもしろいよ」と言うので、Gタンパク質共役受容体のことをすこし調べてみると、彼の研究している核内受容体とは異なり、嗅覚などの感覚関連の受容体を除いても400種類ほどあると知ったんです。

岸本 そんなにあるんですか。

柳沢 ええ。その半分ぐらいで、まだリガンドが見つかっていませんでした。「まずはリガンドを見つけることを目指そう。リガンドの機能解析は後でやればいい」と考えて、リガンドの探索を始めました。
それで、最初に見つかったのが、オレキシンだったんです。

岸本 そうだったんですか。オレキシンはどのように得られたんですか。

柳沢 ウシの視床下部とラットの全脳から抽出液をとり、液体クロマトグラフィーにかけて、という従来からの方法でした。

岸本 それで、見つけたオレキシンが、特定のGタンパク質共役受容体に結合することを突き止めたんですね。

柳沢 ええ、そうです。

夜間のマウスの行動変化からオレキシンと睡眠の関連性を解明

岸本 さっき「とりあえずは見つけることを目指して、機能解析は後で」と言っておられましたね。すると、その次はオレキシンの機能解析をされたんですね。

柳沢 そうです。

岸本 まずは、分泌される場所から機能を推測するといったアプローチでしょうかね。オレキシンを、ウシの視床下部などから抽出したと言っておられましたが……。

柳沢 ええ。基本的にはオレキシンは脳にしかないとわかりました。脳の中でも、産生ニューロンは外側視床下部という場所にしかないとわかったんです。
教科書を見ると「外側視床下部は食欲に関する部位」とあります。実際、マウスにオレキシンを脳室内投与してみたところ、摂食量が増えました。同時に、そのマウスを絶食させて空腹状態にすると、オレキシンmRNAの量も増えました。これらの結果から「オレキシンは食欲の因子かもしれない」と考えました。

岸本 そうしたことがあって、オレキシンは食欲にかかわるペプチドだと考えて、研究を進められたんですね、最初は。

柳沢 はい。それで、次の段階として当然ながらオレキシンのノックアウトマウスをつくりました。「普通に過ごさせていれば痩せてくるだろうし、高脂肪食をあたえても太らないだろう」と期待していました。

岸本 結果はどうなりましたか。

柳沢 オレキシンノックアウトマウスはむしろ太っていったんです。期待を裏切られました。「これは困った」と思いました。
それで、当時はというと、マウスが夜行性動物であるにもかかわらず、夜の行動を観察することはほとんどされていなかったんです。昼にマウスの実験をして、昼に観察をするだけ。でも、マウスの食事量を昼と夜で分けると、夜が9割と圧倒的なんです。だから、夜におけるマウスの摂食行動を見なければなりません。
そこで、赤外線カメラを入手しました。私は「赤外線カメラは高価だろう」と思っていたところが、ソニーが赤外線を使って暗闇でも撮れる民生用ビデオカメラを1台5万円くらいで売っていたんです。「こんなに安いのか」と購入して、夜間撮影を始めました。担当してくれたポスドクはアメリカ人の小児科医でしたが、“もの言わぬ赤ちゃん”ならぬ“もの言わぬマウス”の観察にも長けていました。

岸本 小児科医だから（笑）。

柳沢 そんな中である日、彼が学生とともに「なんか変なことが起きている。ちょっと見てくれ」と言ってきたんです。

岸本 マウスがバタッといくやつですか。

柳沢 そうです。はじめ私が見たときは、そんな明瞭にはマウスは倒れ込みませんでしたが、よく見ると、動きがやはり変でした。
そこから先は、もう鑑別診断でしたね。てんかんの可能性も除外できず、とにかく脳波は調べなければなりません。当時、マウスの脳波を測定できる研究室は、世界でも数か所しかなかったんです。でもラッキーなことに、テキサス大学にはマウスで睡眠を研究しているクリス・シントンという英国人の生理学者がいて、彼にマウスの脳波測定法を教わることができました。

岸本 オレキシンノックアウトマウスの脳波を調べて、どんなことがわかりましたか。

柳沢 覚醒中にレム睡眠が入り込むという、通常ではありえないことが起きているとわかりました。これは、とりもなおさずナルコレプシーとおなじ症状です。
もし、マウスが倒れ込む原因がてんかんだったら、てんかんは研究され尽くしているから論文を1報ぐらい書いてさっさと手を引こうと思っていました。ところが、蓋を開けてみると睡眠に関わることだったんです。オレキシンが欠乏することで、ナルコレプシーが起きるとわかってきました。

岸本 すると、次は論文づくりですかね。

柳沢 ええ。その論文については、じつは裏話があって。スタンフォード大学のエマニュエル・ミニョーという睡眠学者も昔から遺伝型ナルコレプシーのイヌの家系を研究していたんです。ミニョーは研究をどこまで進めているのだろうか、と。1999年のアメリカ睡眠学会に、マウスの脳波測定法を教えてくれたクリス・シントンが参加するというので、彼にミニョーの研究の進捗具合について探りを入れて来てくれと頼みました。学会で彼はミニョーを見つけると、私どものオレキシンノックアウトマウスの脳波データを見せて、さらに「僕のコラボレーターがこんなマウスをもっているんだが、どう思う」と聞いちゃったんです。
ミニョーは「これはナルコレプシーだ」とわかっただけでなく、「そのコラボレーターとは、オレキシンを発見したヤナギサワだ」と気づいたみたいです。すぐに彼の研究室のポスドクだった角谷寛さん（現・滋賀医科大学特任教授）に電話をして「いますぐオレキシンの受容体をシーケンシングしてくれ」と言ったらしいんです。やろうと思えば3日で答えが出ます。それで、彼らに、オレキシン受容体の遺伝子こそが、ナルコレプシーの遺伝をもたらすものだと知られてしまったんです。

岸本 そんなことがあったんですか。

柳沢 そういったことが起きているとはつゆ知らず、私たちは証拠をきちんと整えて論文にしようと、じっくり取り組んでいる最中でした。すると突然、『セル』の編集長だったベンジャミン・ルインから電話がかかってきました。

岸本 ルインですか。私も彼が編集長のころ、よく論文を投稿してましたよ。

柳沢 私も前年にオレキシン発見の論文を『セル』で発表していたので、ルインは私のことを知っていて「おまえが発見したペプチドが、ナルコレプシーと関係しているっていう論文が送られてきたんだが、おまえのところはこの研究をやっていないのか。やっていないならレフェリーになってくれ」と言うんです。私は「うちもやってる！」と言って電話を切り、スクランブル体制で論文をつくって投稿したんです。

岸本 ミニョーとおなじタイミングで掲載されたんですか。

柳沢 2週間あとでした。いま考えると、最初からミニョーとはコラボレーションすべきだったのかもしれません。

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